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Abbildung 4.5

: Coomassie-gefärbte Blaue Native Page zur Molekulargewichtsbestimmung

des Gesamtkomplexes MtrA-H. Auf Bahn 1 sind die zur Größenabschätzung aufgetragenen

Eichproteine zu sehen, auf Bahn 2 der Komplex MtrA-H. Dessen Molekulargewicht liegt nach

dieser Methode bei ca. 300 kDa.

Abtrennung der Untereinheit MtrH vom Gesamtkomplex MtrA-H:

Neben der in Abschnitt 4.2.1 beschriebenen Entfernung von MtrH während der

Membranpräparation wurde auch eine Abtrennung vom bereits gereinigten

Gesamtkomplex versucht. Dazu wurden eine Verschiebung des pH-Wertes, eine

Anzahl von Detergenzien, eine Hitzebehandlung und Pufferlösungen mit

unterschiedlichem NaCl-Gehalt getestet (siehe Tabelle 4.2). Die Proben wurden

mehrfach mit der jeweiligen Pufferlösung verdünnt und mittels eines Konzentrators

mit 100 kDa-Membran eingeengt. Der Austausch des Detergenz geschah anhand

einer PD-10-Säule. Die Proben wurden anschließend per SDS-Page oder

Gelfiltration auf Superose 6 analysiert.

Durch die angewendeten Methoden war es nicht möglich, MtrH abzutrennen und

gleichzeitig den restlichen Komplex MtrA-G stabil zu halten. Entweder blieb der

Gesamtkomplex MtrA-H bestehen, oder es kam bei zu harschen Bedingungen zur

Bildung von höhermolekularen Aggregaten bzw. zur Präzipitation des Proteins.

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