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3 Methoden

3.3 Kultivierung von Bakterien

3.3.1 Bestimmung der Zelldichte

Zur Bestimmung der Zelldichte wurde die optische Dichte bei 600 nm (OD

600

welche sich proportional zur Zelldichte verhält, mittels eines Photometers bestimmt.

3.3.2 Kultivierung für die Plasmidpräparation

Für die analytische Plasmidpräparation wurden 5 mL, für präparative Zwecke

100-250 mL LB-Medium mit dem entsprechenden Antibiotikum versetzt und mit

plasmidtragenden E. coli-Bakterien von einer Agar-Platte bzw. mit 1-2,5 mL einer

Übernachtkultur angeimpft. Nach 17 h Schütteln bei 37 °C wurden die Zellen durch

Zentrifugation geerntet (5000 x g, 4 °C, 10 min).

3.3.3 Kultivierung für die Proteinproduktion

Für die Proteinproduktion wurden von den entsprechenden plasmidtragenden

E. coli-Stämmen (vgl. Tabelle 3.7) zunächst Glycerinkulturen angelegt. Hierzu

wurden 5 mL LB-Medium mit einem geeigneten Antibiotikum versetzt und mit einer

Kolonie von einer Festagarplatte angeimpft. Bei 37 °C wurde unter Schütteln bis zu

einer OD

600

von 0,5 angezogen, sodann auf Eis gekühlt und je 830 µL Zellkultur mit

170 µL sterilem Glycerin (37 % w/v) versetzt. Die Glycerinkulturen wurden in

flüssigem Stickstoff schockgefroren und bei -80 °C gelagert.

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