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in der Wachstumsrate (5.12) wie der Stamm V1 verhielt, so als würde das Gen sdmC

exprimiert. Daher lag die Vermutung nahe, dass das Gen sdmC unter der Kontrolle

eines zweiten separaten Promotors steht, der zwischen sdmB und sdmC liegen

müsste. Unter dieser Annahme wäre die mRNA von sdmC im Deletionsstamm

V1∆sdmB bei Selenmangel mittels einer RT-PCR nachweisbar.

Mit dem Primer RTmetIIB wurde mittels einer reversen Transkription ein DNA-

Gegenstrang zur mRNA des Gens sdmC synthetisiert. Die dafür verwendete

Gesamt-RNA wurde aus dem Stamm V1

∆

sdmB präpariert. Das Transkript von sdmC

wurde dann durch die Amplifikation eines ca. 400 bp großen Fragments über die

Oligonukleotide RTmetIIfw und RTmetIIrv am Gegenstrang nachgewiesen (Abb. 19A,

Spur 2 und 4). Die Bindestellen der Oligonukleotide sind schematisch im oberen Teil

der Abb. 19A dargestellt. Das Produkt wurde nicht erhalten, wenn die Amplifikation

vor der reversen Transkription durchgeführt wurde (Abb. 19A, Spur 3 und 5). Wurde

als Positivkontrolle eine PCR mit den Oligonukleotiden an der chromosomalen DNA

aus dem Stamm V1

∆

sdmB durchgeführt, dann wurde das Fragment ebenfalls

nachgewiesen (Abb. 19A, Spur 6). Die Oligonukleotide, jeweils einzeln in der PCR

eingesetzt, erzeugten kein Signal (Abb. 19A, Spuren 6, 7 und 8).

Die Anwesenheit der mRNA von sdmC im Stamm V1

∆

sdmB ließe sich auch erklären,

wenn der eingefügte Terminator des Gens pacN ein Überlesen der Polymerase

zuließe. Dies wurde ebenfalls über eine RT-PCR überprüft. Die mRNA sollte sich

dann von pacN über das Gen sdmC erstrecken. Mit dem Primer RTmetIIB wurde ein

DNA-Gegenstrang zur mRNA von sdmC aus einem Gesamt-RNA-Extrakt aus dem

Stamm V1∆sdmB synthetisiert. Bei anschließender Amplifikation mit den

Oligonukleotiden RTpac und RTmetIrvB wurde jedoch das erwartete ca. 850 bp

große Fragment nicht erhalten (Abb. 19B, Spuren 2 u. 4). Eine PCR war nur an der

chromosomalen DNA erfolgreich (Abb. 19B, Spur 6). Ein Überlesen des Terminators

wurde somit ausgeschlossen und angenommen, dass sich zwischen den Genen

sdmB und sdmC ein zweiter separater Promotor des Gens sdmC befindet. Zur

Übersichtlichkeit sind die Bindestellen der Oligonukleotide im oberen Teil der

Abb. 19B schematisch dargestellt.

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