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5.5 Das Gen sdmA wird nur bei Selenmangel transkribiert

In der 2D-Elektrophorese wurde gezeigt, dass das Protein SdmA nur bei

Selenmangel synthetisiert wird (Niess, 2001). Erfolgt die Regulation der Expression

auf Transkriptionsebene, dann sollte der Messenger von sdmA nur unter

Selenlimitierung nachweisbar sein. Dies wurde durch eine Northern-Blot-Analyse mit

der Sonde I (siehe 5.2) geklärt. Die Hybridisierungstemperatur betrug dabei 55°C.

Die Bindestelle der Sonde ist schematisch in der Abb. 10A dargestellt. In der Analyse

wurde die RNA aus Kulturen mit unterschiedlichen Wachstumsbedingungen

miteinander verglichen. Dazu erfolgte die Präparation der RNA aus selenhaltigen

bzw. selenlimitierten Kulturen. Zusätzlich wurde zur Kontrolle RNA aus Zellen

gereinigt, die in selenhaltigem Medium einem permanenten Hitzestress von 42°C

ausgesetzt waren.

Ein Transkript des Gens sdmA wurde tatsächlich nur bei Selenmangel nachgewiesen

und nicht bei Anwesenheit von Selenit (Abb. 10B, Spur 1 und 2). Ein Signal wurde in

der Northern-Blot-Analyse auch dann nicht festgestellt, wenn die Zellen in

selenhaltigem Medium einem permanenten Hitzestress von 42°C ausgesetzt waren

(Abb. 10B, Spur 3). Dadurch wurde ausgeschlossen, dass die Transkription des

Gens sdmA der Regulation durch generellen Stress unterliegt. Die

Hitzeschockantwort wird in M. voltae ab einer Temperatur von 40°C induziert. Dabei

werden unter anderem generelle Stressproteine exprimiert, deren Synthese sich

auch durch andere Faktoren induzieren lässt (Hebert et al., 1991). Die Qualität der

eingesetzten RNA wurde durch eine Färbung der Membran mit Methylenblau

überprüft. Die Banden der 23S und 16S rRNA sind dort deutlich erkennbar

(Abb. 10C).

Wurde dem Medium Selen zu einer Endkonzentration zugesetzt, die über 100 nM

lag, war das sdmA-Transkript nicht mehr nachweisbar (Abb. 10D, Spuren 4-9). Die

unterschiedlichen Signalstärken in Abb. 10D beruhen darauf, dass nicht exakt die

gleichen Gesamt-RNA-Mengen in dem Agarosegel aufgetrennt und dann transferiert

wurden, wie die Methylenblaufärbung der verwendeten Membran zeigt (Abb. 10E).

Die längsten detektierten RNA-Moleküle hatten eine Größe zwischen 3 000 - 4 000

Nukleotiden. Die kürzeren Fragmente waren vermutlich durch den Abbau des

vollständigen Messengers entstanden.

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