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dargestellt. Hieraus wird ersichtlich, dass das Gen durch Rekombination zweier

homologer Bereiche mit dem Konstrukt ausgetauscht und dabei der Resistenzmarker

eingefügt wurde. Die Deletionsmutanten von sdmB und sdmC wurden auf die gleiche

Weise hergestellt wie auch eine Doppelmutante der Gene sdmB und sdmC. Beim

Austausch von sdmC in der Einzelmutante und in der Doppelmutante blieb ein ca.

570 bp großes Fragment des 3´-Bereichs dieses Gens erhalten.

Die jeweiligen Fragmente für die Deletionen wurden durch die Behandlung der

Plasmide pNPAC-sdmA, pNPAC-sdmB, pNPAC-sdmC und pNPAC-sdmBC (siehe

4.7 in Material und Methoden) mit den Restriktionsendonukleasen Spe I und Nhe I

erhalten. Nach der Auftrennung in einem Agarosegel wurden sie anschließend eluiert

und jeweils 5 pmol für die Transformation verwendet. Die Transformation erfolgte mit

dem M. voltae-Stamm V1, der eine chromosomale Kopie eines Reportergens trägt,

das nur bei Selenmangel exprimiert wird (Pfeiffer et al., 1998).

sdmA

sdmC

sdmB

Tmc

Psl

Abb. 14: Deletionsmutagenese des Gens sdmA

Die Deletion des Gens sdmA erfolgte durch eine zweifache homologe Rekombination, wie durch die

Kreuze angedeutet ist. Psl: Promotor des S-layer-Gens (Kansy et al., 1994; Konisky et al., 1994);

pacN: Gen der Puromycin-N-Acetyltransferase zur Selektion; Tmcr: Terminator der Gene der Methyl-

Coenzym M-Reduktase (Müller et al., 1985).

5.10 Charakterisierung der erhaltenen M. voltae-Klone V1

∆

sdmA,

∆

sdmB, V1

∆

sdmC und V1

∆

sdmBC

Es wurde erwartet, dass die nach der Transformation erhaltenen,

puromycinresistenten Klone von M. voltae V1 eine Deletion des jeweiligen Gens

sdmA, sdmB oder sdmC aufweisen. Im Fall der Doppelmutante wurde ein Austausch

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