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Signal, wodurch eine Wechselwirkung der Sonde mit der Vektorsequenz

auszuschließen war.

Sonde I

2000 bp

Eco RV

1200 bp

sdmA

2000

1200

1031

3000

1500

A B

Abb. 6: Southern-Blot-Analyse des Gens sdmA

A: Schematische Darstellung der Schnittstellen von Eco RV in der chromosomalen DNA von M. voltae

aus dem Bereich um das Gen sdmA.

B: 5 µg chromosomale DNA von M. voltae wurden mit Eco RV behandelt und in einer Southern-Blot-

Analyse untersucht. Für die Hybridisierung wurde die Sonde I verwendet. Die Bindestelle der Sonde

ist in der schematischen Darstellung angedeutet. bp: Längenstandard in Basenpaaren.

5.3 Im 3´-Bereich des Gens sdmA liegen die offenen Leseraster

sdmB und sdmC

An den aus den verschiedenen Screeningverfahren erhaltenen Klone wurde die

Sequenz des 5´- und 3´-Bereichs des Gens sdmA mit den Standard-

Sequenzierprimern M13fw und M13rv teilweise ermittelt. Die Bindestellen dieser

Oligonukleotide findet man in den gängigen Vektoren und sie ermöglichen die

Sequenzierung eines eingefügten Fragments, wenn es von diesen Stellen flankiert

ist. Bei sehr großen Inserts ist die Sequenzierung allein mit den Standardprimern

nicht mehr möglich. Die Sequenz von sdmA und des umgebenden Bereichs, die

durch M13fw und M13rv nicht ermittelt werden konnte, wurde mit den Primern

ird800corri25, ird800P2walker5B, corrimet16RV und corrimet16FW bestimmt. Dabei

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