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5 Ergebnisse

Wie bereits in der Einleitung erwähnt, werden die Gene der Hydrogenasen Vhc und

Frc nur bei Selenmangel transkribiert (Berghöfer et al., 1994). In

Expressionsanalysen mittels der 2D-Elektrophorese wurden weitere Proteine

identifiziert, die ebenfalls nur unter Selenlimitierung synthetisiert werden (Niess,

2001). Die Bestimmung der N-terminalen Peptidsequenzen erfolgte von zwei, aus

den Gelen ausgeschnittenen Proteinen. Von einem wurde zudem auch interne

Peptidsequenzen nach Behandlung mit Trypsin ermittelt. Verwandte Proteine

konnten aus den Teilsequenzen zu diesem Protein durch eine Datenbankrecherche

nicht gefunden werden.

Für das andere jedoch wurde ein verwandtes Protein mit unbekannter Funktion und

einer Übereinstimmung der N-terminalen Peptidsequenz von 79% in M. jannaschii

gefunden. Es wird in dieser Arbeit nicht untersucht, da es bei M. jannaschii

vermutlich keine zu M. voltae vergleichbare Anpassung an Selenmangel gibt.

Beispielsweise wächst M. jannaschii im Gegensatz zu M. voltae nicht auf einem

selenarmen Medium (Burggraf et al., 1990; Mukhopadhyay et al., 1999).

5.1 Identifizierung des Gens sdmA

Für weitere Untersuchungen war es notwendig zunächst das Gen des Proteins zu

identifizieren, dessen Funktion in der vorliegenden Arbeit geklärt werden soll.

Anhand der oben erwähnten internen Peptide wurden die heterologen Primer

pep2ufw(sdm) und pep1urv(sdm) zur Ermittlung des Gens a/jointfilesconvert/481994/bgeleitet. Als Matrize

wurde genomische DNA aus M. voltae eingesetzt. Mit den beiden Primern entstand

ein ca. 500 bp großes PCR-Produkt, das nach dem Einsetzen in den Vektor Topo

pCR 2.1 sequenziert wurde. Die Sequenz ist in Abb. 5 dargestellt. Allerdings konnte

der 5´- und 3´-Bereich des Gens über die PCR nicht bestimmt werden. Diese

Sequenzen wurden durch ein Screening einer chromosomaler Phagenbank von

M. voltae und partieller chromosomaler Plasmid-Genbanken über eine

Koloniehybridisierung ermittelt. Eine Übereinstimmung der identifizierten DNA-

Sequenz mit dem ausgeschnittenen Protein wurde durch ein internes Peptid

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